小鼠甲肝抗體IgM(HAV IgM)ELISA試劑盒使用說明書

發(fā)布時間： 2023/2/13　　點擊次數(shù)： 2079次

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本試劑盒僅供研究使用：

檢測范圍：96T

0.3 ng/L -18 ng/L

使用目的：

本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中甲肝抗體IgM(HAV IgM)含量。

小鼠甲肝抗體IgM(HAV IgM)ELISA試劑盒實驗原理：

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中小鼠甲肝抗體IgM(HAV IgM)水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入甲肝抗體IgM(HAV IgM)，再與HRP標記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的。顏色的深淺和樣品中的甲肝抗體IgM(HAV IgM)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠甲肝抗體IgM(HAV IgM)濃度。

試劑盒組成：

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶
3	標包被板	12孔×8條
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶
5	顯色劑 A液	6ml×1瓶
6	顯色劑 B液	6ml×1瓶
7	終止液	6ml×1瓶
8	標準品（4000 pg/ml）	0.5ml×1瓶
9	標準品稀釋液	1.5ml×1瓶
10	說明書	1份
11	封板膜	2張
12	密封袋	1個

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

16 ng/L	5號標準品	15041的原倍標準品加入1501標準品稀釋液
8 ng/L	4號標準品	150u1的5號標準品加入150u1 標準品稀釋液
4 ng/L	3號標準品	15041的4號標準品加入15041 標準品稀釋液
2 ng/L	2號標準品	15041的3號標準品加入150m1 標準品稀釋液
1 ng/L	1號標準品	150u1的2號標準品加入150u1 標準品稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉）。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

操作程序總結：

說明書圖片.JPG

計算：

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

小鼠甲肝抗體IgM(HAV IgM)ELISA試劑盒注意事項：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期：

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月

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